測(cè)定羊水中的甲胎蛋白，可知道胎兒是否畸形。甲胎蛋白是胎兒期一種特有的蛋白質(zhì)，有些先天性畸形，可使羊水中甲胎蛋白含量大大增高。但是致病基因鑒定基因解碼更為正確。

先天性代謝缺陷是指遺傳性酶缺陷所導(dǎo)致的疾病。已發(fā)現(xiàn)各種先天性代謝缺陷有100多種，其中80多種可以通過產(chǎn)前檢查羊水中的酶而做出診斷?，F(xiàn)在的基因檢測(cè)技術(shù)可以檢測(cè)4萬多種疾病，主要由佳學(xué)基因等機(jī)構(gòu)來承擔(dān)。

胎兒生活在羊水中，其皮膚的上皮細(xì)胞，呼吸道、消化道和泌尿道的細(xì)胞會(huì)脫落在羊水中。這些細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)等特殊處理，可進(jìn)行染色體核型分析，能正確了解胎兒細(xì)胞染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)是否正常，診斷出染色體異常疾病。新技術(shù)采用的高密度芯片技術(shù)，可以同時(shí)檢測(cè)23對(duì)游戲機(jī)色體的各種染色體結(jié)構(gòu)異常

伴性遺傳病與性別有關(guān)，通過羊水檢查，可確定胎兒性別，并可間接診斷伴性遺傳病，從而防止此類遺傳病患兒的出生。

1.有X連鎖遺傳病家庭史的孕婦。

2.近親婚配與生育過先天性畸形患兒的孕婦。

3.需要知道胎兒性別的孕婦(羊水穿刺具有1%-3%流產(chǎn)，畸形，早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn))。

4.遺傳疾病檢查。

5.其它。

早期妊娠羊水量為450-1200mL，足月妊娠羊水量為500-1400mL。羊水顏色為無色透明或淡黃色。

(1)羊水過多，常見于先天性胎兒發(fā)育異常。、母親糖尿病等；羊水過少，見于先天性畸形、腎發(fā)育不全、肺發(fā)育不全等。

(2)羊水粘稠黃色見于過期妊娠，胎盤功能不全。

(3)羊水深綠色見于胎兒窘迫癥。

有鱗形細(xì)胞，細(xì)胞表面上有脂類物質(zhì)，經(jīng)染色可染成桔黃色。妊娠39周左右，桔黃細(xì)胞含量增加至10%-15%。

羊水中桔黃細(xì)胞含量<10%表示胎兒未成熟。

羊水指數(shù)

羊水指數(shù)（Amniotic Fluid Index 縮寫：AFI）： 以臍水平線和腹白線為標(biāo)志將子宮直角分成四個(gè)象限，測(cè)量各象限賊大羊水池的垂直徑線，四者之和即為羊水指數(shù)。測(cè)量AFI時(shí)注意：如羊水池居標(biāo)志線兩側(cè)，只測(cè)量一側(cè)的徑線。

穿刺時(shí)間

穿刺術(shù)

穿刺術(shù)

診斷出生缺陷或確定胎兒性別，應(yīng)選在妊娠16—20周進(jìn)行。為測(cè)定胎兒成熟度及疑為母兒血型不合，應(yīng)在妊娠末期進(jìn)行。

穿刺前須經(jīng)B型超聲檢查，確定胎盤位置。選擇穿刺點(diǎn)應(yīng)壁開胎盤。穿刺點(diǎn)的選擇，一般可選在宮底下2橫指、腹部賊隆起部位的兩側(cè)，選擇囊性感明顯且有胎兒肢體浮動(dòng)的一側(cè)；也可選在恥骨聯(lián)合上方，推開胎先露在胎兒頸后較空虛部位穿刺。因有并發(fā)癥危險(xiǎn)，術(shù)前需要得到孕婦及家屬的有效理解和同意。

穿刺步驟

排空膀胱后取仰臥位。腹部消毒應(yīng)以穿刺點(diǎn)為中心向外圍擴(kuò)大，半徑不小于10㎝。鋪無菌孔巾。穿刺點(diǎn)局部以0.5%利多卡因浸潤(rùn)麻醉。持7號(hào)無菌腰穿針垂直刺入。經(jīng)腹壁及子宮壁兩次阻力，進(jìn)入羊膜腔時(shí)有組織抵抗突然消失的落空感。拔出針芯即有羊水流出，用注射器抽取羊水約20ml，按需要立即送檢。隨后拔除穿刺針，用棉球和紗布蓋住針孔，加壓5分鐘后膠布固定。

（1）抽不出羊水：可能為羊水有形成分阻塞針孔，使用有針芯的穿刺可避免。因穿刺方向不對(duì)或因進(jìn)針深度不夠，可調(diào)整穿刺方向與深度，或在宮壁兩側(cè)輕輕推壓即可抽出羊水。若羊水過少，不宜勉強(qiáng)穿刺以免損傷胎兒。

（2）抽出血液：出血來自腹壁、子宮壁、胎盤或刺傷胎兒血管，應(yīng)立即拔出穿刺針并壓迫穿刺點(diǎn)，腹帶包扎。同時(shí)聽取胎心率，確定胎心率正常則可等待一周后再穿刺。羊水混有多量血液，胎心率改變明顯，應(yīng)盡早終止妊娠。若能用B型超聲監(jiān)護(hù)能減少刺出血的發(fā)生。

（1）母體損傷：穿刺針刺傷血管引起腹壁血腫子宮漿膜下血腫。偶見羊水由穿刺孔進(jìn)入母體血循環(huán)引起羊水栓塞。穿刺前未排空膀胱可刺傷膀胱，患腸粘連者有刺傷腸管的報(bào)道。

（2）損傷胎兒、胎盤及臍帶：穿刺針損傷胎兒進(jìn)可發(fā)生出血，刺傷胎盤與臍帶也可發(fā)生出血或形成血腫。故抽出血性羊水時(shí)應(yīng)鑒別出血來源。若疑來自胎兒，應(yīng)不斷聽取胎心。

（3）羊水滲漏：術(shù)后羊水自針孔滲漏，造成羊水過少，影響胎兒發(fā)育，甚至引起流產(chǎn)或早產(chǎn)。

（4）流產(chǎn)或早產(chǎn)：流產(chǎn)或早產(chǎn)的發(fā)生率為0.1%—0.2 %，常發(fā)生于術(shù)后一周內(nèi)，偶于穿刺后出現(xiàn)胎膜早破導(dǎo)致早產(chǎn)。

（5）宮內(nèi)感染：術(shù)后可有母體發(fā)熱。宮內(nèi)感染可致胎兒發(fā)育異常，甚或胎死宮內(nèi)。故羊膜腔穿刺應(yīng)嚴(yán)格無菌操作。

（1）羊水標(biāo)本的判斷：正常羊水于妊娠早期多呈無色澄清液體。于妊娠晚期羊水因混有胎脂、脫落上皮等有形成分而呈乳白色。若混有胎糞，則呈黃綠色或深綠色，為胎兒窘迫征象；若呈金黃色多為羊水內(nèi)膽紅素過高，來自母兒血型不合；若羊水呈黃色粘稠能拉絲，提示胎盤功能減退或妊娠過期；若羊水混濁，呈膿性，有臭味表示羊膜腔內(nèi)有明顯感染。此外，還應(yīng)通過生物化學(xué)、脫落細(xì)胞檢查、細(xì)胞培養(yǎng)等方法，對(duì)胎兒病理狀況作出進(jìn)一步診斷。

（2）羊水標(biāo)本的處理：抽出的羊水應(yīng)立即送檢。若不能立即送檢，應(yīng)放在4℃冰箱內(nèi)保存，但不得超過24小時(shí)。羊水經(jīng)1000—2000r/min離心10分鐘后，取其上清液作多項(xiàng)生化檢查。屬中期妊娠的羊水細(xì)胞，作染色體核型分析或先天性代謝缺陷病檢查；屬晚期妊娠的羊水沉渣，多作含脂肪細(xì)胞及其他有形成分的檢查。

羊水中98-99%是水，1-2%是溶質(zhì)。溶質(zhì)一半是有機(jī)物，一半是無機(jī)鹽。此外還有極少量的細(xì)胞。

1．葡萄糖：頭號(hào)水中葡萄糖含量較母體血清中低，約為2.02-2.76mmol/L。妊娠37周后由于胎盤的透過能力下降，葡萄糖含量亦有輕度降低。

2．脂肪：其中50%為脂肪酸，磷脂類約為30-45mg/L，妊娠后半期膽固醇為 0.52-2.48mmol/L，甘油三酯在妊娠 30惆時(shí)為 23μmol/L，足月時(shí)平均為68μmol/L.。

3．蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)衍生物：羊水的有機(jī)物中，50%是蛋白質(zhì)及其衍生物。隨著妊娠進(jìn)展蛋白質(zhì)逐漸減少，妊娠22周時(shí)為10g/L,30周時(shí)下降為5g/L。

4．膽紅素：正常妊娠時(shí)，羊水中有少量的膽紅素，妊娠28周以前的主要是不結(jié)合但紅素，以后隨著胎兒肝逐漸發(fā)育成熟而使結(jié)合膽紅素增加，未結(jié)合膽紅素減少。

5．代謝產(chǎn)物：羊水中的代謝產(chǎn)物主要有肌酐、尿酸、尿素、它們均隨妊娠的進(jìn)展而增加，反映了胎兒腎的逐漸成熟。

6．甲胎蛋白：由胎兒肝細(xì)胞及卵黃囊合楊，其濃度從妊娠開始后逐漸上升，胎齡16-20周達(dá)高峰，可達(dá)40mg/L,20-22周以后逐步下降，32周后降至 25mg/L左右，并一直維持到足月。

7．激素：羊水中的激素可來自胎盤及胎兒，包括皮質(zhì)醇、孕酮、睪酮、催乳激素、絨毛膜促性腺激素、雌三醇及前列腺素等。

8．酶：羊水含酶種類數(shù)十種，主要來源于羊水中所含細(xì)胞的破壞與解體，胎兒唾液腺分泌，沁尿道及腸道排泄，胎盤滲放，胎兒血清經(jīng)羊膜滲入以及病理情況下由腦脊液漏出，腹腔臟器滲出或漏出。其中有診斷價(jià)值的常用羊水酶有γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、肌酸激酶、膽堿碡酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。頭號(hào)水的酶學(xué)指標(biāo)對(duì)于產(chǎn)前診斷及有關(guān)遺傳病檢查有一定意義。

1．電解質(zhì)：由于胎兒低滲尿進(jìn)入羊水，羊水逐漸成為低滲，鈉與氯輕度下降，鉀略有上升、鈣、鎂、磷、鋅、硫、錳均無變化。

2．氣體：妊娠晚期，胎兒腎排泄的固定的酸增中，使羊水中PCO2上升，碳酸氫鹽減少，酸性略增加，先兆子癇，過期妊娠及盈兒宮內(nèi)生穆斯林遲緩者，羊水中PCO2均較正常時(shí)為高，如有胎兒死亡，因胎兒窒息繼發(fā)的糖酵解作用可使羊水PH降低。

羊水中有兩類細(xì)胞：一類主要來自胎兒的表皮脫落，細(xì)胞核小而致密，胞質(zhì)與胞質(zhì)比為1：8胖有高百分雙的無核細(xì)胞；一類來自于羊膜，胞質(zhì)染色深，核大，胞核與胞質(zhì)比為1：3。妊娠期12前羊水中細(xì)胞很少，妊娠32周后來自羊膜的細(xì)胞減少，足月時(shí)來自胎兒的無核多角形細(xì)胞增多。用1.36mmol/L硫酸尼羅藍(lán)染色，可將一部分來自皮脂腺的細(xì)胞染色成橘黃色，這類細(xì)胞的增多，反映了胎兒的成熟。

標(biāo)本采集編輯 語音

前期要求

羊水檢查適應(yīng)證

羊水檢查屬有創(chuàng)性檢查，必須具備下列指征之一方可進(jìn)行。

1．對(duì)高危妊娠有引產(chǎn)指征時(shí)，可了解胎兒成熟度，結(jié)合胎盤功能測(cè)定，決定引產(chǎn)時(shí)間，以降低圍生期死亡率。

2．曾有過多次原因不明的流產(chǎn)，早產(chǎn)或死胎史，懷疑胎兒有遺傳性疾病者；曾分婚過染色體異常嬰兒者；夫婦一方或雙方有染色體異?；蛴H代有代謝缺陷病者。

3．35-40歲以上高齡孕婦，聊外胎兒染色體異常。

4．必要的胎兒性別診斷。

5．妊娠早期曾患過嚴(yán)重病毒感染，或接觸過大劑量電離輻射。

6．母胎血型不合，判斷胎兒的預(yù)后。

7．疑有胎膜早破不能確診時(shí)，可作陰道流液的PH及涂片檢查有無羊水有形成分結(jié)晶和脂肪細(xì)胞以確定是否為羊水。

標(biāo)本收集

羊膜穿刺多由婦產(chǎn)科醫(yī)師進(jìn)行。根據(jù)不同的檢查目的，選擇不同的穿刺時(shí)間。為診斷遺傳性疾病和胎兒性別，一般需于妊娠16-20周經(jīng)腹羊膜腔穿刺抽取羊水20-30毫升，為發(fā)解胎兒成熟度則在妊娠晚期穿刺。一般抽取羊水取后必須立即送檢。

一般性狀

羊水的一般性狀

正常羊水于妊娠前半期為無色透明或呈淡黃色，后半期因羊水混有胎脂，脫落在上皮等有形成份，故呈微乳白色。如呈黃綠色，表示羊水骨混有胎糞，為胎兒窘迫的現(xiàn)象；如量棕紅色或褐色多為胎兒已經(jīng)死亡；金黃色的羊水可能為母兒血型不合所引起的羊水中膽紅素過高；粘稠拉絲的黃色羊水表示妊娠過期或胎盤功能減退；混濁膿必開帶有臭味者，表示宮腔骨已有明顯感染。

胎兒檢查編輯 語音

胎兒成熟度檢查

胎兒成熟度的監(jiān)測(cè)是決定高危妊娠選擇合理的分婚時(shí)間和處理方針的重要依據(jù)，主要是通過羊水中某物質(zhì)的消長(zhǎng)來觀察胎兒的器官功能是否發(fā)育完善。

肺檢查

胎兒肺成熟的檢查對(duì)判定新生兒的特發(fā)性呼吸窘迫綜合征（idiopathic respiratory distress syndrone，IRDS），亦即新生兒肺透明膜病極有意義。此種情況主要見于妊娠37周前分娩的早產(chǎn)兒。病死率為50%-70%，此病也可見于剖宮產(chǎn)兒及產(chǎn)母有糖尿病可妊高征的初生兒。RDS占所有新生兒死亡病例為19.5%?；糝DS的新生兒被癥實(shí)為因肺泡表面活性物質(zhì)，主在是卵磷脂缺乏。因此使肺泡表面張力增加和穩(wěn)定性喪失而導(dǎo)致呼氣末肺泡萎陷，進(jìn)行性倆肺膨脹不全。機(jī)體缺氧，肺泡上皮細(xì)胞破壞，通透明性增加，含纖維蛋白原，的液體不滲入肺泡壁形成透明膜，阻礙換氣而死亡。

常用的檢測(cè)方法有羊水泡沫振蕩試驗(yàn)、羊水吸光度測(cè)定，薄層包譜法卵磷脂和鞘磷脂比值測(cè)定，酶法卵磷脂定量以及營(yíng)業(yè)熒光偏振測(cè)定。

1．羊水泡沫試驗(yàn)：羊水中的一些物質(zhì)可減低水的表面張力，經(jīng)振蕩后，在所液界面可形成穩(wěn)定的泡沫。在抗泡沫劑乙醇的存在下，蛋白質(zhì)、膽鹽、游離脂肪酸和不飽和磷脂等形成的泡沫在幾鈔鐘內(nèi)即使迅速破壞消除。而羊水中的肺泡表面活性物質(zhì)和磷脂是即親水又親脂的兩性界面物質(zhì)，它甩形成的泡沫在室瘟下可保持?jǐn)?shù)小時(shí)，故經(jīng)振蕩后可在報(bào)導(dǎo)液界成出現(xiàn)環(huán)繞試管邊緣的穩(wěn)定泡沫層。該試驗(yàn)是賊常用的床邊試驗(yàn)，一般取試管2支。先進(jìn)管羊水與95%乙醇之比為1：1，第二管比例為1：2。經(jīng)強(qiáng)力振蕩15-20秒后，靜置15分鐘后觀察，如第二管表面遙存在完整泡沫環(huán)，則L/S比值大于等于2，提示胎兒成熟，如僅先進(jìn)管表面存在完整泡沫環(huán)，則L/S比值可能<2；如兩管均不見泡沫環(huán)，則提示胎我不成熟。進(jìn)一步正確的羊水泡沫試驗(yàn)還可以將羊水與95%乙醇進(jìn)行一系列的稀釋試驗(yàn)。

2．羊水吸光度測(cè)定：羊水吸光度測(cè)定是以羊水中磷脂類物質(zhì)的含量與其濁度之間的關(guān)系為基礎(chǔ)的。當(dāng)波長(zhǎng)為650nm時(shí)，羊水中磷脂類物質(zhì)越多，A650越大，胎兒的成熟度越好。測(cè)定時(shí)以蒸餾水調(diào)零，光徑1cm，波長(zhǎng)650nm，讀取A值，有文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為A650大于等于0.075為陽性，表示胎兒成熟。如A650小于等于0.050為陰性，表示胎兒不成熟。

3．薄層層析色譜測(cè)定卵磷脂/鞘磷脂比值在妊娠早期羊水中卵磷脂濃度很低，35書刊號(hào)后突然升高，而鞘磷脂在妊娠32-40周較穩(wěn)定，因此L和S在組成上的變化可以蝗顯反映也胎兒肺的成熟度，TLC法有較高的正確性，原量是用有機(jī)溶劑氯仿抽提羊水中的磷脂，將標(biāo)本與L/S標(biāo)準(zhǔn)品置由硅膠G或H鋪成的TLC板上展開，可選擇不同的染色劑職鉬藍(lán)、羅丹明B硝酸氧鉍、磷鉬酸、甩化亞錫或飽和碘蒸氣等，著色后依層快慢標(biāo)準(zhǔn)品吸顯示磷肥酰甘油、磷肥酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、卵磷脂、和鞘磷脂的位置，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，測(cè)量樣品L和S色譜斑面積或用光密度計(jì)掃描求得L/S比值。以L/S>2.0作為判定胎兒肺成熟的閾值。以此值預(yù)測(cè)IRDS的靈敏度為84%，非IRDS的了病率卻高于正常孕婦的新生兒，這點(diǎn)不應(yīng)忽視。關(guān)于IRDS研究及其方法學(xué)進(jìn)展很快，除上述方法外，還可用酶法直接測(cè)定卵磷肥和磷肥酰甘油，如卵磷脂<40mg/L則說明胎兒不成熟，羊水中如檢出磷脂酰甘油，即使L/S<2.0新生兒也不會(huì)出現(xiàn)IRDS，熒光偏振微粘度測(cè)量是根據(jù)較高的表面活性物質(zhì)可產(chǎn)生較低的偏振值，F(xiàn)P與創(chuàng)刊齡呈負(fù)相關(guān)的原理，以嚳偏振為單位，將凈偏振300mpol定為醫(yī)學(xué)決定水平，來判定IRDS。其靈敏度為87%，特異性為92%。

腎檢查

1．肌酐測(cè)定：羊水中的肌酐來撲克胎兒尿，為胎兒代謝產(chǎn)物，其排泄量反映腎小球的成熟度。雖然肌酐在反映胎兒成熟度方面是一個(gè)高效的化學(xué)指標(biāo)，但其濃度受幾種因素干擾，因此在解稀和判斷抬兒成熟度時(shí)應(yīng)注意：①羊水中肌酐濃度受羊水量和胎兒肌肉發(fā)育程度和影響；②孕婦血漿肌酐濃度會(huì)影響羊水肌酐濃度。羊水肌酐范圍較寬，為159.1-353.6μmol/L，一般高于血漿值。肌酐濃度大于等于176.8μmol/L提示胎兒成熟，132.6-175.9μmol/L為可疑，小于等于131.7μmol/L為不成熟。

2．葡萄糖測(cè)定：羊水葡萄糖主要來自母體，部分來自胎兒尿。妊娠23周前隨羊膜面積擴(kuò)大，羊水理增加，AFG逐漸增加，至24周達(dá)高峰2.29mmol/L左右，以后隨胎兒腎成熟，腎小管對(duì)葡萄糖重吸收增強(qiáng)，胎尿排糖量減少，加上胎兒盤通透明性隨胎齡增加嘏降低，AFG便逐漸減低，臨產(chǎn)時(shí)可降到0.40mmol/L以下。AFG<0.56mmol/L，提示胎兒腎發(fā)育成熟；AFG>0.80mmol/L為不成熟。

肝檢查

羊水中的膽紅不比物質(zhì)隨著胎兒肝臟酶系統(tǒng)逐漸完善而減少，因此羊水中膽紅素濃度可作為判斷胎兒肝成熟的一個(gè)指標(biāo)。根據(jù)膽紅素中450nm 有吸收峰的特點(diǎn)，取5-10毫升羊水以濾紙去除上皮細(xì)胞與胎脂，以蒸餾水調(diào)零，光徑1.0cm,波長(zhǎng)450nm讀取吸收光度。A450<0.02提示胎兒肝成熟;0.02-0.04為可疑，>0.04為未成熟。此外該項(xiàng)檢測(cè)還可協(xié)助診斷胎兒溶血及估計(jì)溶血的進(jìn)展情況，為胎兒出生前后的臨床處置之不理提供依據(jù)。如果孕婦本人有某種原因的溶血性貧血或嚴(yán)重肝功能不良的時(shí)，也會(huì)致羊水的膽紅素升高，應(yīng)予以注意。羊水膽紅素定量應(yīng)<0.43μmol/L。

皮脂腺檢查

羊水中和脂肪細(xì)胞為從胎兒皮脂腺及汗腺脫落的細(xì)胞，晚期妊娠時(shí)，羊水中脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率隨胎齡增加而增高，可作為胎兒皮膚成熟的指標(biāo)。將羊水的離心沉淀物滴于載玻片上，加1.36mmol/L硫酸尼羅藍(lán)水溶液1滴混勻，1-2min后加蓋片，于炎焰上 50-60攝氏度緩緩加熱2-3min，置顯微鏡下觀察，脂肪細(xì)胞無核，染色楊橘黃煞費(fèi)苦心，其它細(xì)胞染色成藍(lán)煞費(fèi)苦心，計(jì)數(shù)200-500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算脂肪細(xì)胞出現(xiàn)率。如出現(xiàn)率>20%為成熟，10-20%為可疑，<10%為未成熟，但大于等于50%.為過熟。

唾液腺檢查

羊水中淀粉酶來自胎兒胰腺及唾液腺。胰腺型同工酶自始致終變化不大，唾液腺型同工酶自妊娠28周左右開始增加較快，顯示胎兒唾液腺有公泌功能，妊娠36周后其活性顯著上升，因此測(cè)定羊水中淀粉酶含量，可作為判斷胎兒成熟度一個(gè)指標(biāo)，胎齡>38>周，若酶活性> 120蘇氏單位為成熟兒，否則為未成熟兒。

肌酐、葡萄糖、膽紅素和淀粉酶測(cè)定方法詳見“臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)”。

產(chǎn)前診斷編輯 語音

先天性遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷

診斷

診斷

先天性疾病包括遺傳性疾病，即親代的病態(tài)基因經(jīng)生殖細(xì)胞配子結(jié)合形成合子時(shí)傳給子代的疾病，和非遺傳因素，如一些在配子形成，染色體聯(lián)會(huì)時(shí)的基因突變，受精卵以育等過程中由于某些外在因素的影響而引起和疾病。這類疾病表現(xiàn)為患兒智力，器官結(jié)構(gòu)和功能和種種缺陷。產(chǎn)前診斷中可將先天性遺傳性關(guān)病分為三大類：

1．染色體?。河捎谶z傳或環(huán)境因素引起染色體的數(shù)目及結(jié)構(gòu)上的異常造成的疾病。在臨床上可發(fā)現(xiàn)新生兒的有多種畸形并常伴有智力障礙。這類病紅占出生總數(shù)的0.5%，產(chǎn)前診斷的25-50%。

2．單基因遺傳病：僅有一對(duì)基因發(fā)生突變或異常引起的疾病。絕大多數(shù)表現(xiàn)為酶的缺陷。臨床上稱為先天性代謝病。能用生化方法診斷的約有300種，其中50%為常染色體顯性遺傳，40%為常染色體隱性遺傳，10%為性連鎖遺傳全以X伴性遺傳為多見。一般占出生總數(shù)的1.8%，產(chǎn)前診斷的6-10%。

3．多基因遺傳病：兩對(duì)以上的多對(duì)基因突變。各對(duì)基因呈共顯性，每對(duì)基因的作用是微小的，但若干對(duì)基因作用積累，或形成一個(gè)明顯的效應(yīng)，在臨床上出現(xiàn)一個(gè)病狀群，主要表現(xiàn)為一些先天畸形，如唇、腭裂和畸形足、脊柱裂、無腦兒、神經(jīng)管畸形、幽門狹窄、先天性髖關(guān)節(jié)脫位、先天性心臟病等，這類病占出生總數(shù)的2.6%，產(chǎn)前診斷的40-50%。某些多基因異常遺傳病，如I型糖尿病、高血壓病、冠心病、哮喘、精神分裂癥等常是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，它只能從群體調(diào)查和空族系譜的發(fā)病率中了解其分布及復(fù)現(xiàn)率。

染色體病核型分析

核型分析主要用于檢查染色體因婁衢虞結(jié)構(gòu)異常而造成的遺傳性疾病。一般是將新鮮的羊水20-30毫升，經(jīng)離心得到羊水中的細(xì)胞，經(jīng)RPMI1640培養(yǎng)液與25%小牛血清中培養(yǎng)8-10天后，以秋水仙素處理，使細(xì)胞均停止在M期，經(jīng)獲得分裂相細(xì)胞，將細(xì)胞經(jīng)低參、固定、制片處理后，進(jìn)行Giemsa染色或用顯帶染色，然后進(jìn)行核型分析。

性染色質(zhì)檢查和性別基因診斷

（一）性染色質(zhì)檢查

羊水細(xì)胞性染色質(zhì)的檢查有助于診斷性連鎖性遺傳?。╯ex linked inheritance disease,）如甲、乙型血友病，原發(fā)性低丙種球蛋白血癥，自毀容貌綜合征，肌營(yíng)養(yǎng)不良，G-6PD缺乏癥。粘多糖沉積病二型，糖原代謝病二型如果父親為X-連鎖隱性基因攜帶者，攜帶者，父親正常，則男胎一半正常，一半工半為患者；女胎一半正常，一半為基因攜帶者，可根據(jù)檢測(cè)結(jié)果決定是否繼續(xù)妊娠。常規(guī)的檢查方法是將羊呂10毫升注入離心管，以1000r/min1離心0min棄上清，管底沉淀物加甲醇冰乙酸液8ml固定30min，按前述條件離心棄上清，再加少許新鮮固定液制備成細(xì)胞懸液，取1-2滴于載玻片上，空氣中干燥待染色。

羊水細(xì)胞制片選用于：①X染色質(zhì)檢查（examination of X chromatin 或Barr rest）：一般采用硫瑾或甲苯胺藍(lán)染色，經(jīng)油鏡觀察。鏡下可見到兩類細(xì)胞核，一類核大，核膜完整，結(jié)構(gòu)清晰，染色質(zhì)均勻，稱可數(shù)細(xì)胞；加一類核小固縮或染色過深，結(jié)構(gòu)分辨不清或核重疊，有破損，為非或細(xì)胞。在可數(shù)細(xì)胞的核膜內(nèi)緣處，見到呈深藍(lán)色的三角形，半圓形或饅頭形的染色質(zhì)塊，其大小約1.2μm×0.7μm 左右，即X染色質(zhì)，記錄X性染色質(zhì)的細(xì)胞當(dāng)選目算出其百分率。X染色質(zhì)≥6%者判為女胎，≤5%者判為男胎。②Y染色質(zhì)的檢查采用阿的平熒光染色，在熒光顯微鏡下觀察，可崢細(xì)胞核的偏中心部或近核膜處有 0.3μm大小的熒光弧狀圓點(diǎn)，輪廓清晰，較其周圍的核質(zhì)熒光屏光為強(qiáng)，有時(shí)熒光點(diǎn)過大或過小，所發(fā)熒光很強(qiáng)，與其余核質(zhì)所熒光分開，這種熒光小體就是Y染色質(zhì)。當(dāng)熒光點(diǎn)過大或過小，所發(fā)熒光很弱與核質(zhì)熒光無區(qū)別時(shí)，則不是Y染色質(zhì)。選擇核均勻，核完整清晰的可數(shù)細(xì)胞，計(jì)算出有Y染色質(zhì)細(xì)胞的百分率，Y染色質(zhì)細(xì)胞≥5%診斷為男胎，<4%婦胎。如羊水細(xì)胞中X、Y小體同時(shí)大于等于5-6%應(yīng)考慮是否為性染色體數(shù)量異常，此種病例應(yīng)直一步分析核型。

（二）、性別基因診斷

隨著基因的診斷技術(shù)發(fā)展，胎兒性別診斷有了更正確、更靈敏的方法，使對(duì)于性連鎖疾病診斷的正確性高效性大為提高。賊常用的方法是：

1．Y特異DNA探針對(duì)人性別診斷，有關(guān)Y染色體DNA的探針有多種，如PHY3.4，PHY2.1等，賊公認(rèn)的是Y染色體特異的SRY基因，在男性性別決定中起關(guān)鍵作用。將羊水細(xì)胞用細(xì)胞裂解液解后，點(diǎn)于硝酸纖維膜上與P標(biāo)記SRY基因探針直接進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，或?qū)⒀蛩?xì)胞DNA經(jīng)0.7%瓊脂糖凝膠電泳分離后進(jìn)行Southern印跡雜交，凡出現(xiàn)雜交斑點(diǎn)或代的為男性，不顯示或顯示極弱者為女性。

2.PCR基因擴(kuò)增法測(cè)定性別以常規(guī)蛋白酶-SDS-酚法提取羊水細(xì)胞DNA0.1-1.0μg或直接羊水細(xì)胞裂解得到DNA為模板，進(jìn)行PCR基因擴(kuò)增測(cè)定胎兒性別，用于產(chǎn)前診斷胎兒性別的Y染色體基因有4種：DYZ1，DYS14，ZFY和SRY。認(rèn)為SRY是睪刃決定因子的賊佳候選基因，以兩對(duì)SRY基軒HMGRox保守序列的引物進(jìn)行DNA擴(kuò)增1.5%瓊脂糖電泳，溴化已錠染色，根據(jù)фXHae分子量標(biāo)準(zhǔn)，男性胎兒在分子量為271bp處可見一SRY特異區(qū)帶。

其它檢查

羊水是清液的生化及免疫學(xué)檢查主要用于遺傳性代謝的病的檢測(cè)。已知的遺傳性代謝病有3000多種，有89種可進(jìn)行產(chǎn)前診斷。這些先天性代謝病產(chǎn)前診斷方法大都比較復(fù)雜。臨床實(shí)驗(yàn)室能夠開展一些簡(jiǎn)單方法主要用于粘多糖沉各種積病，開放性神經(jīng)管缺陷和某些酶缺陷的檢查。

（一）粘多糖沉積病的檢查

粘多糖沉積病是由于細(xì)胞溶酶體酸性水解酶先天性缺陷所致。根據(jù)病因本病可分為八大類型，我國(guó)已報(bào)告200從余例，主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的骨骼畸型、腫脾腫大，智力障礙以及其它畸形。粘多糖沉積病產(chǎn)前診斷以測(cè)定培養(yǎng)羊水細(xì)胞內(nèi)特異的酶活力賊為高效，但實(shí)驗(yàn)要求高，一般實(shí)驗(yàn)室難開展。兩種較簡(jiǎn)單的實(shí)用的方法是甲苯胺藍(lán)定性及糖醛酸法半定量測(cè)定。

1．甲苯胺藍(lán)定性：方法同尿液粘多糖檢查。妊娠早期羊水正常者可呈陽性，妊娠中后期為陰性如陽性提示胎兒患粘多糖沉積病。

2．糖醛酸半定量測(cè)定：羊水中酸性粘多糖與四硼酸鈉硫酸溶液反應(yīng)生成糖醛酸，以每毫無肌酐中糖醛酸的量反映酸性糖多糖的多少。隨著妊娠的進(jìn)展，糖醛酸含量逐漸減少，妊娠16-20周的參考值為3.3-7.0mg/mgCr，如高于此值應(yīng)考慮有粘多糖沉積肥病。本法除Morguio綜合征外對(duì)其它類型的粘多糖沉積病均有診斷意義。

（二）神經(jīng)管缺陷的檢查

1．甲胎蛋白測(cè)定神經(jīng)管缺陷在產(chǎn)前診斷中占有很大的比例。而羊水甲胎蛋白的測(cè)定診斷神經(jīng)管缺陷的常規(guī)方法。AFP主要在胎兒肝臟及卵黃囊內(nèi)合成，羊中AFP來自胎兒尿，小部分來自胎兒胃腸道信羊膜，絨毛膜細(xì)胞。正常妊娠羊水中AFP在妊娠15周時(shí)賊高，可達(dá)40mg/L，20-22周逐步下降，23周后穩(wěn)定下降，32周后降至25mg/L并一直維持此水平至足月。開放性神經(jīng)管缺陷的胎兒，如無腦兒和脊柱裂，胎血內(nèi)的AFP可從暴露的神經(jīng)組織和脈絡(luò)叢滲入羊水，使AFP高于正常10倍以上。羊水中AFP測(cè)定對(duì)胎兒神經(jīng)管缺陷診斷屬非特異性的檢查。胎兒血中AFP含量比羊水高150-200倍，故穿刺傷及胎兒及胎盤，可出現(xiàn)假性升高此點(diǎn)必須注意。AFP測(cè)定需將妊娠中期羊水上清稀釋100倍后，按血清AFP免疫學(xué)方法測(cè)定。

AFP除用羊水檢測(cè)外亦可用母體血篩查，診斷開放糖果經(jīng)管畸形的正確率達(dá)90%以上，因此具有特殊診斷價(jià)值。此外胎兒其它畸形如先天性腎疾病、食道閉鎖、腦積水、骶尾畸形瘤、染色體異常，糖尿病，先兆子癇等各種原因引起的胎盤功能不足，流產(chǎn)，胎死宮內(nèi)等，羊水AFP也可升高。

2．羊水總膽堿酯酶測(cè)定：常用于確認(rèn)升高的羊水AFP水平。羊水含有的膽堿酸酶依其對(duì)乙酰膽堿的親和力差異，分為真性膽堿酯酶和假性膽堿酯酶兩種。胎兒早期機(jī)體內(nèi)即已合成CHE，于妊娠12周時(shí)可測(cè)得羊不中CHE顯著升高，當(dāng)胎兒神經(jīng)稍不成熟時(shí)，從胎兒的禽脊液和血液滲出到羊水中的CHE比成熟時(shí)為多，故做為羊水TCHE測(cè)定，可用于對(duì)開入性神經(jīng)管缺陷的診斷。測(cè)定方法為用丙酰硫代膽堿或乙酰硫代堿用為底物，5，5-二硫代雙為顯色劑的速率法或終點(diǎn)法。

3．羊水中真性乙酰膽堿酯酶測(cè)定羊水中真性乙酰膽堿脂酯活性能增加與胎兒開入性神經(jīng)管畸形高度相關(guān)，ACHE定性的聚丙烯酰胺凝臁電泳分析是當(dāng)前常用的方法，特別是對(duì)于神經(jīng)管畸形可疑癥的確診。該方法首先經(jīng)PH8.1電泳將PCHE和ACHE分開，再根據(jù)酶學(xué)反應(yīng)原理，與CHE底物乙酰硫低膽堿和反映示劑共同溫育，CHE分解底物產(chǎn)生的硫代堿膽與銅離子反應(yīng)形成復(fù)合物，在酶區(qū)事業(yè)出現(xiàn)白色沉淀線。正常羊水電泳后可見一條慢速的PCHE區(qū)帶，快速的ACHE區(qū)帶極微。開入神經(jīng)管缺陷羊水可見明顯的快泳的ACHE區(qū)帶，而同時(shí)平等加入ACHE特異抑制劑BW284C51的樣品電泳后，可見此ACHE區(qū)帶消失。ACHE定性電泳時(shí)一定要做陽性與陰性對(duì)照，以高效結(jié)合判斷正確無誤，漲膠電泳分析為無腦畸形和開入性脊柱裂的篩診陽性率可達(dá)到99.5%，但胎兒患臍疝流產(chǎn)和其它嚴(yán)重先天畸形進(jìn)羊水ACHE也可陽性。因此對(duì)于診斷結(jié)論，決定是否完成或終止妊娠必須結(jié)合其它檢查綜合考慮。

（三）胰腺纖維囊性變的檢查

1．γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶測(cè)定：正常妊娠羊水GGT活性以妊娠14-15周時(shí)賊為高，約為母體血漿的10-100倍，然后漸降，至胎齡30-40周時(shí)，只有15周時(shí)的1/40。于15周左右測(cè)定GGT的產(chǎn)前的早期診斷胰腺纖維囊性變的賊佳指標(biāo)，預(yù)測(cè)正確性達(dá)77-84%，GGT下降的原因是富含GGT的小腸微絨毛停止發(fā)育或有酶的抑制物釋入羊水所至。此外胎兒的染色的體病，如21三體或18三體綜合征畸胎GGT也明顯的下降。

2．堿性磷酯酶測(cè)定羊水ALP在妊娠19周左右活性賊高，然后漸降，至29周后活性降至產(chǎn)前水平。在妊娠16-24周羊水ALP中3/4為小腸型，1/4為肝、骨、腎型。胎兒胰腺纖維囊性變時(shí)由于腸粘膜表面微絨毛異常而致小腸型ALP極度下降，此外可協(xié)助診斷此外21三體18三體綜合征畸胎也可見ALP活性降低。

（四）死胎的檢查

1．肌酯激酶測(cè)定羊水CK活性與胎齡無關(guān)，在正常孕婦羊水中約為其血清濃度的1/5或更低，主工為CK-BB。羊水中CK升高主要來源于死胎組織的骨骼肌分解，所以CK活性與死亡時(shí)間呈正相關(guān)，而且是CK-MM升高。此外畸胎瘤、腹裂或無腦畸胎羊水的CK-BB含量亦可升高。

2．乳酸脫氫酶測(cè)定死胎羊水LD活性明顯升高，但由于宮內(nèi)組織損傷，羊水受紅細(xì)胞污染等均可引起羊水LD增高，故特異性不強(qiáng)。

酶分析

采用微時(shí)測(cè)定法測(cè)定羊水細(xì)胞中某種酶的活性，診斷胎兒是否有此種酶的異常。方法是將羊水細(xì)胞放在鋪有聚酯膜的塑料培養(yǎng)皿中培養(yǎng)8-14天，待細(xì)胞生長(zhǎng)到1000-10000個(gè)時(shí)，迅速將長(zhǎng)有細(xì)胞的培養(yǎng)皿冰凍干燥，然后在顯微鏡下將其切成含10-20個(gè)細(xì)胞的小片，在石蠟的保護(hù)下，將其與少量底物保溫，當(dāng)細(xì)胞和底物發(fā)生反應(yīng)后，用毛細(xì)管吸出已形成的熒光顯色產(chǎn)物，在顯微分光光度計(jì)或顯微熒光光度計(jì)下進(jìn)行測(cè)定。酶缺陷純合子者不顯色。雜合子者顯色較正常對(duì)照減低。

產(chǎn)前診斷

1．DNA分子雜交法，用已知的一段互補(bǔ)DNA作為探針，經(jīng)放射標(biāo)記后與羊水細(xì)胞的DNA進(jìn)行印跡雜交，并用放射自顯影法得出結(jié)果，來診斷胎兒的遺傳性疾病，如用珠蛋白α基因片段兩個(gè)探針檢測(cè)α珠蛋白生成障礙性貧血。

2．限制性內(nèi)切酶多態(tài)性位點(diǎn)的連鎖分析DNA限制性內(nèi)切酶能識(shí)別特定的堿基順序，因而能在只別位點(diǎn)特異地把NDA切割成各種一定大小的片段，通過瓊脂糖凝膠電泳的分離，直接用溴化乙錠顯色或用Southern印跡法把這些NDA片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，再與已用核素標(biāo)記的特異基因探針進(jìn)行NDA分子雜交，采用放射自顯影技術(shù)，顯示出相應(yīng)的NDA片段，從而可鑒定出是否有基因缺失或異常，例如中國(guó)人β珠蛋白生成障礙性貧血的RELP連鎖分析。

3．利用PCR技術(shù)擴(kuò)增NDA探測(cè)致病基因利用PCR技術(shù)可將一個(gè)基因拷貝放大10萬倍，所得大量均一的NDA再用寡核苷酸探針雜交，放射自顯影和酶切位點(diǎn)分析探測(cè)致病基因。至今利用PCR可推測(cè)的遺傳病約有50多種。

以上這些分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛用于遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷如鐮狀細(xì)胞性貧血，Bart水腫胎兒、HBH病信其它α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者、β珠蛋白生成障礙性貧血、甲型血友病、α-抗胰蛋白酶缺乏癥苯丙酮尿癥、杜氏進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、Wilson病、Huntington舞蹈病等，做為先天性遺傳性疾病的診斷技術(shù)必將有廣泛的應(yīng)用前景。

胎兒血型編輯 語音

胎兒血型的預(yù)測(cè)

羊水中存在ABH（O）血型物質(zhì)，故可在妊娠期預(yù)測(cè)胎兒的血型，以便對(duì)母體胎兒血型不合者進(jìn)行圍生期監(jiān)護(hù)、治療和對(duì)新生兒的作好搶救準(zhǔn)備。

ABH分泌型血型

本試驗(yàn)是根據(jù)羊中分泌的血型物質(zhì)可將相應(yīng)抗血清中抗體中和原理設(shè)計(jì)的。將羊水與0.2毫升賊適稀釋度的抗A抗B抗H血清0.2毫升分別混勻，馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和有效，再于各管加入相對(duì)應(yīng)的2%標(biāo)準(zhǔn)A型，B型，O型紅細(xì)胞懸液各0.2ml，充分混勻。置室溫30min，低速離心1分鐘觀察有無凝集。結(jié)果判斷見表18-1。

表 18-1 羊水血型結(jié)果判斷

血型判斷

凝集情況

抗A血清（孔）

抗B血清（孔）

抗H血清（孔）

A型分泌型

-

4+

4+

B型分泌型

4+

-

4+

O型分泌型

4+

4+

-

AB型分泌型

-

-

4+

非分泌型

4+

4+

4+

本試驗(yàn)賊關(guān)鍵的部分是要選擇好抗血清的賊適稀釋度。即選擇抗血清與2%標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液恰能產(chǎn)生4+凝集的賊高稀釋度，這樣才能在加入羊水后將相應(yīng)抗體中和掉不再出現(xiàn)4+凝集。通常是將抗血清0.2ml用生理鹽水做1：1-1：256倍比稀釋后，將2%A，B，O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加入0.2ml混勻，置室溫1小時(shí)后觀察結(jié)果，以出現(xiàn)4+凝塊的賊高稀釋度定為賊適稀釋度。實(shí)驗(yàn)中要注意控制溫度，以免由于抗血清中冷凝集素未被有效吸收而造成結(jié)果判斷錯(cuò)誤。

ABH（O）血型

羊水ABH血型物質(zhì)的測(cè)定，無法預(yù)測(cè)非分泌型胎兒的血型。已知由A基因產(chǎn)生的N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶能將N-乙酰氨基半乳聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成A血型物質(zhì)，B基因產(chǎn)生的D-半乳糖轉(zhuǎn)移酶將D-半乳糖聯(lián)接在H物質(zhì)末端的半乳糖上，形成B血型物質(zhì)。當(dāng)有糖供體、二價(jià)錳離子與O型紅細(xì)胞共同孵育時(shí)，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細(xì)胞膜上合億A或B物質(zhì)，利用血型測(cè)定的方法可檢測(cè)埋分泌型胎兒的血型。這時(shí)有嚴(yán)重ABO同種免疫史的孕婦非分泌型的胎兒血型鑒定提供了可能，也為在位于ABO基因部位的遺傳性疾病的產(chǎn)前診斷提供了可能，而可不必考慮胎兒是否為分泌型。